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飼養(yǎng)層細(xì)胞是什么

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  飼養(yǎng)層細(xì)胞的影響,主要體現(xiàn)在飼養(yǎng)層種類、絲裂霉素處理飼養(yǎng)層的時(shí)間、飼養(yǎng)層細(xì)胞的代數(shù)和飼養(yǎng)層細(xì)胞的密度等。下面是學(xué)習(xí)啦小編精心為你整理的飼養(yǎng)層細(xì)胞的介紹,一起來看看。

  飼養(yǎng)層細(xì)胞的介紹

  飼養(yǎng)層細(xì)胞就是指一些特定細(xì)胞(如顆粒細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、輸卵管上皮細(xì)胞等已在體外培養(yǎng)的細(xì)胞),經(jīng)有絲分裂阻斷劑(常用絲裂霉素)處理后所得的細(xì)胞單層。一般鋪在明膠層上(也可不鋪)。飼養(yǎng)層細(xì)胞大部分可用MEF(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)。

  不論ES細(xì)胞或EG細(xì)胞,原代或初期培養(yǎng)階段一般都需依賴于能分泌他們?cè)隗w外存活增殖所必需的生長因子的飼養(yǎng)層細(xì)胞。不同類型的飼養(yǎng)層細(xì)胞分泌的生長因子略有不同,但都要求培養(yǎng)過程中的飼養(yǎng)層細(xì)胞不分裂不增殖而仍保持代謝活性。是細(xì)胞培養(yǎng),尤其是胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)常用的生長增殖促進(jìn)劑和分化抑制劑。

  飼養(yǎng)層細(xì)胞的影響因素

  飼養(yǎng)層的影響,主要體現(xiàn)在飼養(yǎng)層種類、絲裂霉素處理飼養(yǎng)層的時(shí)間、飼養(yǎng)層細(xì)胞的代數(shù)和飼養(yǎng)層細(xì)胞的密度等。動(dòng)物種類不同對(duì)飼養(yǎng)層種類的要求也不同。

  飼養(yǎng)層種類

  STO PMEF: 對(duì)各種動(dòng)物都較適宜,,但最可靠的方法還是根據(jù)動(dòng)物種類篩選最佳飼養(yǎng)層為宜。有研究表明,PMEF比STO更適合用于小鼠ES(胚胎干細(xì)胞)的培養(yǎng)。

  UE(子宮上皮細(xì)胞)

  BRL(大鼠肝細(xì)胞)等

  動(dòng)物種類

  需要經(jīng)過篩選來確定最適宜該種動(dòng)物ES分離克隆的飼養(yǎng)層

  絲裂霉素處理滋養(yǎng)層的時(shí)間

  目前絲裂霉素(常用有絲分裂阻斷劑)處理時(shí)間在小鼠成纖維細(xì)胞上一般要求為:在37攝氏度,5%二氧化碳飽和溫度的條件下處理24h,時(shí)間過短達(dá)不到預(yù)定目的,成纖維細(xì)胞不能被成功地抑制住,時(shí)間過長則使細(xì)胞老化,活性下降,分泌因子的能力降低,從而直接影響ES細(xì)胞增殖和分化的抑制。同時(shí)處理完的清洗工作也很重要,一般要求用無鈣鎂PBS沖洗4~5遍,以確保絲裂霉素的徹底清除。

  飼養(yǎng)層細(xì)胞的代數(shù)及密度

  以小鼠成纖維細(xì)胞為例,選3~5代,密度為10^6-10^7個(gè)/ml為宜,代數(shù)過低所含雜細(xì)胞太多,代數(shù)過高則細(xì)胞活力降低。

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