兔耳風(fēng)沖劑學(xué)術(shù)論文
兔耳風(fēng)沖劑學(xué)術(shù)論文
兔耳風(fēng)，中藥名。為菊科兔兒風(fēng)屬植物光葉兔兒風(fēng)的全草。小編整理了兔耳風(fēng)沖劑學(xué)術(shù)論文，歡迎閱讀!
兔耳風(fēng)沖劑學(xué)術(shù)論文篇一
兔耳風(fēng)提取物的抑菌作用研究
作者：葛菲 張曉偉 裴各琴 陳武 賴學(xué)文 劉慶華
【摘要】 目的比較不同極性溶劑提取鐵燈兔耳風(fēng)與杏香兔耳風(fēng)成分對3種常見微生物的抑菌作用。方法 采用水、70%乙醇、95%乙醇及醋酸乙酯等不同極性的溶劑提取;用管碟法測抑菌圈的大小進行抑菌實驗，用兩倍稀釋法進行最小抑菌濃度的測定。結(jié)果極性大的溶劑所提取出的成分對細菌(金黃色葡萄球菌)有明顯抑菌作用，杏香兔耳風(fēng)水提取物的最小抑菌濃度為6.25%,鐵燈兔耳風(fēng)水提取物的最小抑菌濃度為3.13%。極性小的溶劑提取出的成分對霉菌(白色念球菌)有抑菌作用。結(jié)論不同極性的提取物抑菌作用各不相同。
【關(guān)鍵詞】 兔耳風(fēng);提取物;抑菌作用
Abstract：ObjectiveTo compare the effect of different polarity extracting reagents Ainsliaea macroclinidioides and A. fragrans on three kinds of common microorganisms. MethodsThe active substance was extracted from Ainsliaea with water, 70% ethanol,95% ethanol and ethyl acetate. The inhibitory effect was determined by adopting the cup plate method.The minimal inhibitory concentration (MIC)was tested by double dilution method in tubes.Results The extracts from strong polarity solvent had obvious inhibitory effect on bacteria(Staphylococcus aureus), and the minimal inhibitory concentration of A. fragrans was 6.25%when it was extracted with water, A. macroclinidioides was 3.13%. The extracts from weak polarity solvent had inhibitory effect on fungus(Candida albicans). ConclusionAntibacterial effects of Ainsliaea extracts by different polarity solvent are different.
Key words：Ainsliaea; Extracts; Inhibitory effects
兔耳風(fēng)屬Ainsliaea DC植物是菊科(Compositae)帚木菊族(Mutisieae Cass)，全世界七十余種,分布于亞洲東南部。 中國 植物志記載我國有44種4變種，除1種產(chǎn)于東北外，其余均產(chǎn)于長江流域及其以南各省。兔耳風(fēng)屬植物多為民間及地區(qū)常用中草藥，廣泛用于 治療 感冒咳喘、風(fēng)濕痹痛、跌打損傷、活血止血、腸炎痢疾、咽喉炎及泌尿系統(tǒng)疾病等癥。目前，對本屬植物的研究不多，且主要集中為化學(xué)成分方面 [1～5]。本實驗對杏香兔耳風(fēng)和鐵燈兔耳風(fēng)的不同溶劑提取物的抑菌活性進行初步研究。
1 材料與儀器
1.1 菌種
1.1.1 細菌金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(25923)、大腸桿菌(Escherichia coli)(25922)由江西省兒童 醫(yī)院 檢驗科提供;
1.1.2 真菌白色念珠菌(Candida albicans)(90029)由江西省醫(yī)科所微生物室提供。
1.2 儀器
SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵,RE52-99旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器,OLSB-5/10低溫冷卻液泵,高速中藥粉碎機,培養(yǎng)皿,移液管,牛津杯,試管,HF-105A數(shù)控電熱恒溫培養(yǎng)箱，YXQ-SG46-280型手提式壓力蒸氣消毒器等。
1.3 培養(yǎng)基
金黃色葡萄球菌、大腸桿菌用血瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)，白色念球菌用沙氏培養(yǎng)基培養(yǎng)。
1.4 藥材
鐵燈兔耳風(fēng)Ainsliaea macroclinidioides Hayata和杏香兔耳風(fēng)A. fragrans Champ.均采自江西婺源，并經(jīng)筆者鑒定。
2 方法
2.1 鐵燈兔耳風(fēng)提取物的制備
2.1.1 水提物
將鐵燈兔耳風(fēng)剪碎后，用粉碎機適當(dāng)粉碎，稱取200 g粉碎后藥材置于5 000 ml燒瓶中，加入蒸餾水，浸泡30 min。置電熱套中緩緩加熱至沸，并保持微沸狀態(tài)4 h，停止加熱，趁熱過濾，將水提液濃縮為浸膏。
2.1.2 醇提物
稱取粉碎鐵燈兔耳風(fēng)藥材100 g置于燒瓶中，加入95%乙醇，浸泡30 min，回流提取2次，第1次2 h，第2次1.5 h。過濾，合并濾液?；厥找掖?，將濾液濃縮至浸膏狀。同法可得70%乙醇提取物。
2.1.3 酯提物
稱取粉碎鐵燈兔耳風(fēng)藥材100 g置于1 000 ml燒瓶中，加入500 ml醋酸乙酯，浸泡30 min?；亓魈崛?次，第1次2 h，第2次1.5 h。過濾，合并濾液。回收醋酸乙酯得浸膏。
2.1.4 樣品制的制備
樣品液的制備將鐵燈兔耳風(fēng)的4種提取物配制成含生藥量為50g/100 ml的樣品液。
2.2 杏香兔耳風(fēng)提取物的制備
2.2.1 水提物
稱取粉碎杏香兔耳風(fēng)藥材100 g置于燒瓶中，加入蒸餾水，其余步驟同鐵燈兔耳風(fēng)水提法。
2.2.2 醇提物
稱取粉碎杏香兔耳風(fēng)藥材50 g置于燒瓶中，加入95%乙醇，其它操作同鐵燈兔耳風(fēng)乙醇提取物提取法。用70%乙醇提取，其它操作同上，得70%乙醇提取物。
2.2.3 酯提物
稱取粉碎杏香兔耳風(fēng)藥材45 g置于燒瓶中，其它操作同鐵燈兔耳風(fēng)醋酸乙酯提取物提取法。
2.2.4 樣品液的制備
將杏香兔耳風(fēng)的4種提取物配制成含生藥量為50 g/100ml的樣品液。
2.3 種菌的準備
在超凈工作臺上將大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌分別接種于各自培養(yǎng)基上，在37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。制成種菌備用。
2.4 培養(yǎng)基的準備
取30.4 g血瓊脂培養(yǎng)基于錐形瓶中，加入800 ml蒸餾水;取6.6 g沙氏培養(yǎng)基及瓊脂粉8 g于錐形瓶中，加入400 ml蒸餾水，與包扎好的培養(yǎng)皿、移液管、牛津杯、試管等一起放入滅菌鍋中高壓蒸氣滅菌20 min(103.4 kPa)。
2.5 抑菌活性的測定
培養(yǎng)基倒好平板后，冷卻至凝固。用接種環(huán)挑取上述活化后菌種，涂滿整個平板，蓋好平皿蓋，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，制成含菌平板。然后在平板上等距離分散的輕輕放上4個牛津杯，在杯內(nèi)分別注入100 μl樣品液。以上操作均在無菌室內(nèi)進行。
把每個處理過的培養(yǎng)皿放到如下條件培養(yǎng)：細菌37 ℃，24 h;霉菌24 ℃，48 h。測定抑菌圈直徑，取其平均值。并以此判斷兔耳風(fēng)不同溶劑提取物對供試菌的抑制效果。
2.6 最小抑菌濃度(MIC)的測定(兩倍稀釋法)
根據(jù)抑菌圈的測定結(jié)果，選取金黃色葡萄球菌做最小抑菌濃度(MIC)的測定，選取杏香兔耳風(fēng)和鐵燈兔耳風(fēng)的水、70%乙醇、95%乙醇提取物做為樣品溶液。
挑取金黃色葡萄球菌一環(huán)接種于肉湯培養(yǎng)基中，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。取1支無菌試管倒入2 ml肉湯，接種已培養(yǎng)24 h的金黃色葡萄球菌一環(huán)，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)6 h。
取54支試管分為6組，每組9支。在1～6號試管中各加入1ml肉湯，并在1號試管中加入1 ml藥液，從第2支試管開始依次從前支試管取1 ml混合液加入下一支試管并混勻。從6號試管中吸取的1 ml直接棄去。將7號試管加入1 ml肉湯，8號、9號試管加入1 ml藥液。即每組試管樣品含生藥量濃度為：25，12.5，6.25，3.l3，1.56，0.78，0，50，50 g/100ml。將已培養(yǎng)6 h的菌液取出，各取一環(huán)加入10 ml肉湯中，適當(dāng)振搖。用試管吸取，在1～8號試管中加入1滴含菌的肉湯。將上述試管置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。于 24 h取出，肉眼觀察結(jié)果，液體渾濁管為陽性管，液體澄清管為陰性管 ，找出最低藥物濃度的陰性管則為該種物質(zhì)的最低抑菌濃度。
2.7 數(shù)據(jù)處理
實驗數(shù)據(jù)均為3次平行實驗結(jié)果的平均值。
3 結(jié)果
3.1 不同極性不同種類提取物抑菌活性比較
不同極性提取液對金黃色葡萄球的作用不同。見表1～2。其中杏香兔耳風(fēng)水提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑可達30 mm，但醋酸乙酯提取物對金黃色葡萄球菌無抑制作用。同時，杏香兔耳風(fēng)的抑菌效果要優(yōu)于鐵燈兔耳風(fēng)。見圖1～2。表1 杏香兔耳風(fēng)不同極性提取物的抑菌圈直徑(略)表2 鐵燈兔耳風(fēng)不同極性提取物抑菌圈直徑(略)
3.2 最小抑菌濃度的比較
經(jīng)過觀察培養(yǎng)物中試管透明度，同時對培養(yǎng)物用涂布平板法檢查細菌生長情況， 計算 兔耳風(fēng)提取物的最小抑菌濃度。見表3～4。表3 杏香兔耳風(fēng)提取物對金黃色葡萄球菌最小抑菌濃度(略)表4 鐵燈兔耳風(fēng)提取物對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度(略)
由表3～4可知，杏香兔耳風(fēng)水提取物的最小抑菌濃度為6.25%，抑菌效果低于鐵燈兔耳風(fēng)(最小抑菌濃度3.13%);但70%，95%乙醇提取物的最小抑菌濃度分別為3.13%，6.25%，則抑菌效果略高于鐵燈兔耳風(fēng)最小抑菌濃度。對照試管7號有大量菌生長。8，9號試管無菌。
4 討論
通過兔耳風(fēng)不同溶劑提取物對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌3種常見微生物抑菌作用的測定，結(jié)果表明，杏香兔耳風(fēng)與鐵燈兔耳風(fēng)的四種不同極性提取物對金黃色葡萄球菌的抑制作用不同，抑菌作用由強到弱依次為：水>70%乙醇>95%乙醇，而醋酸乙酯提取物對金黃色葡萄球菌無抑制作用。由此表明，提取溶劑極性越強對金黃色葡萄球菌抑菌作用越強，并且隨著濃度的增加，各提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌活性都得以提高。杏香兔耳風(fēng)與鐵燈兔耳風(fēng)的95%乙醇、醋酸乙酯提取物對白色念珠菌有一定的抑制作用;水、70%乙醇提取物對白色念珠菌無作用。但杏香兔耳風(fēng)與鐵燈兔耳風(fēng)的四種不同極性提取物對大腸桿菌都無抑菌作用。
目前已將杏香兔耳風(fēng)為主藥制成片劑、顆粒劑和膠囊劑上市，主要用于 治療 宮頸糜爛[6]、子宮內(nèi)膜炎[7]等疾病。民間驗方也有用杏香兔耳風(fēng)配伍治療熱癤、鵝口瘡、蛇咬傷等。兔耳風(fēng)不同溶劑的提取物，對細菌、霉菌有不同的抑菌作用，甚至沒有抑制作用，說明同一種藥材里面存在著不同極性的抑菌物質(zhì)，本文為其在民間及臨床應(yīng)用提供了一定的體外抑菌實驗依據(jù)。
【 參考 文獻 】
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